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暗场光学显微镜技术是利用斜射照明法阻挡透过标本细节的直射光,以反射光和衍射光来观察标本。在普通显微镜下直射光透过标本的时候,一部分光被吸收,另一部分光透射或折射,形成标本细节内部结构的真实投影。因此,在普通显微镜下所看到的是物体形态和结构。而在暗场光学显微镜下从侧面照射到物体的光束,绕射或反射造成物体外形的侧影。因此暗场显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动。
普通显微镜下可以看到0.45um的细节,而暗场显微镜下竟能看到0.2-0.004um的极徽小物体。这个范围的物体叫亚粒子,因此暗场光学显微镜也可以称裂隙限外显微镜。
暗场光学显微镜特别适用于胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动,适用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动,医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子.在这一点上,暗场光学显微镜远比其他种类显微镜要*得多。